Исследуемый материал
Сыворотка крови
Метод определения
Метод Вестерн-блота.
Высокоспецифичный тест диагностики и мониторирования H. pyloi - ассоциированного гастрита и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки.
Метод Вестерн-блота для определения антител к H. Pylori, в отличие от обычного ИФА, даёт дифференцированные сведения о наличии антител к целому спектру антигенов возбудителя. Это достигается электрофоретическим разделением белков экстракта H. Pylori. В результате выявляется порядка 15 антигенов (полный антиген), что значительно повышает информативность исследования.
Использующиеся в анализе антигены разделяют на три категории:
- 1 категория - перекрёстнореагирующие и неопределённые антигены;
- 2 категория - уреаза В (антиген с м.в. 66 кДа);
- 3 категория - видоспецифичные и высокоспецифичные антигены.
Данная диагностическая система прямо отличает специфические антигены от неспецифических. Поэтому вестерн-блот метод гарантирует высокую специфичность исследования.
Клинические изоляты H. Pylori можно разделить на 2 типа. Штаммы H. pylori I типа могут экспрессировать специфический вакуолизирующий цитотоксин (VacA) и цитотоксин-ассоциированный белок (CagA). Штаммы, не способные синтезировать этот белок, относят к типу II. Инфекции, вызванные агентом I типа, оказываются более патогенными, клинические симптомы включают гастрит и образование язв, возможны отдаленные последствия в виде злокачественной лимфомы и аденокарциномы желудка. Указанные белки входят в состав специфических антигенов, используемых для тестирования антител к H. Pylori методом иммуноблота, что также даёт дополнительную информацию для специалистов.
Состав используемых для выявления антител к H. Pylori специфических антигенов: CagA p120 (белок, ассоциированный с цитотоксином А, высокоспецифичен), VacA p95 (вакуолизирующий цитотоксин А, высокоспецифичен), p75 (неспецифичен), FSH p57 (белок жгутиковых, неспецифичен, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими уреазу), Ure B p66 (тяжёлая субъединица уреазы, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими уреазу), гомолог HSP p57 (гомолог белка теплового шока, неспецифичен), флагеллин p54 (неспецифичен, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими флагеллин), p50 (неспецифичен), p41 (неспецифичен), p33 (предположительно специфичен), CMP p30 (белок наружной мембраны, видоспецифичен), UreA p29 (лёгкая субъединица уреазы, высокоспецифичен), p26 (высокоспецифичен), CMP p19 (белок наружной мембраны, видоспецифичен), p17 (предположительно специфичен).
Антитела класса IgG появляются в крови вслед за IgM антителами (которые впоследствии исчезают через несколько недель после первого контакта с возбудителем инфекции). Инфекция H. Pylori обычно не проходит сама по себе, патологический агент может присутствовать в течение всей жизни человека. IgG выявляются в сыворотке крови многие годы, являясь индикатором инфицирования. Отсутствие специфических IgG позволяет с высокой степенью достоверности отвергнуть диагноз H. pylori-ассоциированного гастрита или язвы, хотя их присутствие не является абсолютным доказательством данного заболевания.
Антитела класса IgA появляются спустя некоторое время после контакта с H. Pylori. Этот тип антител (секреторные антитела), характерен больше для слизистых оболочек, где они образуются локально и обеспечивают местную защиту. IgA не всегда обнаруживаются в крови. Положительные результаты по IgA к H. Pylori хорошо коррелируют с активностью гастрита, считается, что повышенный титр IgA может выполнять роль маркёра хронической инфекции.
Литература
- Жебрун А.Б., Лазебник Л.В., Щербаков П.Л. и соавт. Диагностика и лечение заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с инфекцией Helicobacter pylori (практическое руководство для врачей). – Санкт-Петербург – Биоград, 2006.
- D Vaira, J Holton, M Menegatti, et al. New immunological assays for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. Gut . 1999; 45 (Suppl 1): pp. I23 - I27.
- Материалы фирмы – производителя реагентов.
