Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) - CD3, CD4, CD8, CD19, CD16,56

Описание

Исследуемый материал Цельная кровь (с ЭДТА)

Метод определения Иммунофенотипирование (проточная цитофлюориметрия, безотмывочная технология)

В профиль входят следующие показатели:

Лимфоциты, абсолютное значение,
Т-лимфоциты (CD3+),
Т-хелперы (CD3+CD4+),
Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD8+),,
Иммунорегуляторный индекс (CD3+CD4+/CD3+CD8+),
В-лимфоциты (СD19+),
ЕК-клетки (CD3-CD16+CD56+),
Т-ЕК-клетки (CD3+CD16+CD56+).

Лимфоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. Физиологическая роль их может быть различной. Эти структуры являются мишенями при иммунофенотипировании лимфоцитов как антигенные маркёры различных субпопуляций, присутствие которых определяют с помощью меченых моноклональных антител. Поверхностные антигенные структуры на клетках, выявляемые моноклональными антителами, назвали кластерами дифференциации (CD, clusters of differentiation). Кластерам дифференциации в целях стандартизации присвоены определённые номера. Используя флюорохром-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определёнными CD, можно произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям. Это позволяет понять природу некоторых заболеваний, оценить состояние пациента, следить за течением и прогнозировать дальнейшее развитие заболевания.

Основные субпопуляции лимфоцитов

Т-лимфоциты – лимфоциты, созревание которых происходит в тимусе (отсюда их название). Они участвуют в обеспечении клеточного иммунного ответа и контролируют работу В-лимфоцитов, ответственных за образование антител, т. е. за гуморальный иммунный ответ.

Т-хелперы (от англ. «to help» – помогать) – разновидность Т-лимфоцитов, несут на своей поверхности структуры, способствующие распознаванию антигенов, презентированных вспомогательными клетками, участвуют в регуляции иммунного ответа, вырабатывая различные цитокины.

Цитотоксические Т-клетки - распознают фрагменты антигена на поверхности клеток-мишеней, ориентируют свои гранулы по направлению к мишени и высвобождают их содержимое в области контакта с ней. При этом некоторые цитокины являются сигналом гибели (по типу апоптоза) для клеток-мишеней.

В-лимфоциты (от лат. «bursa» - сумка, по названию сумки Фабрициуса, в которой созревают эти лимфоциты у птиц) - проходят развитие в лимфоузлах и других периферических органах лимфоидной системы. На поверхности эти клетки несут иммуноглобулины, функционирующие как рецепторы к антигенам. В ответ на взаимодействие с антигеном В-лимфоциты отвечают делением и дифференциацией в плазматические клетки, вырабатывающие антитела, посредством которых обеспечивается гуморальный иммунитет.

ЕК-клетки (естественные киллерные клетки, или натуральные киллеры) – клетки с естественной, неиммунной цитотоксической активностью к неопластически изменённым клеткам-мишеням. ЕК-клетки не относятся ни к зрелым Т- или В-лимфоцитам, ни к моноцитам.

Т-ЕК (ЕКТ)-клетки – это клетки с естественной неиммунной киллерной активностью, имеющие признаки Т-лимфоцитов.

Кластеры дифференциации антигенов

CD3 – поверхностный маркёр, специфичный для всех клеток субпопуляции Т-лимфоцитов. По функциям относится к семейству белков, формирующих комплекс мембранной передачи сигнала, связанный с Т-клеточным рецептором.

CD4 – характерен для хелперных Т-клеток; представлен также на моноцитах, макрофагах, дендритных клетках. Он связывается с молекулами MHC класса II, экспрессированными на антигенпрезентирующих клетках, облегчая распознавание пептидных антигенов.

CD8 – характерен для супрессорных и/или цитотоксических Т-клеток, ЕК-клеток, большей части тимоцитов. Это рецептор Т-клеточной активации, который облегчает распознавание клеточно-связанных антигенов MHC класса I (major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости).

CD16 – используется вместе с CD56 преимущественно для идентификации ЕК-клеток. Представлен также на макрофагах, тучных клетках, нейтрофилах, некоторых Т-клетках. Это компонент рецепторов, связанных с IgG, опосредующих фагоцитоз, продукцию цитокинов и антителозависимую клеточную цитотоксичность.

CD19 – присутствует на B-клетках, их предшественниках, фолликулярных дендритных клетках, считается самым ранним маркёром B-клеточной дифференциации. Регулирует развитие, дифференциацию и активацию B-клеток.

CD56 – прототипный маркёр ЕК-клеток. Помимо ЕК-клеток присутствует на эмбриональных, мышечных, нервных, эпителиальных клетках, некоторых активированных Т-клетках. CD56-позитивны такие гематологические опухоли, как ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, анапластическая крупноклеточная лимфома, плазмоклеточная миелома (плазмоклеточная лейкемия CD56-негативна). Это молекулы адгезии клеточной поверхности, которые облегчают гомофильную адгезию и участвуют в контактном ингибировании роста, ЕК-клеточной цитотоксичности, развитии нервных клеток.

Литература

Зурочка А.В., Хайдуков С.В. и др. - Проточная цитометрия в медицине и биологии. – Екатеринбург: РИО УрО РАН, 2013. – 552 с.
Клиническая иммунология и аллергология / Ред. Лолор-младший Г., Фишер Т, Д. Адельман Д../: Пер. с англ. - М.: Практика, 2000. - 806 с.
Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. Том 2./Ред. Долгов В.В., Меньшиков В.В./ – М., ГЭОТАР-Медиа, 2012 – 808 с.
Практическое руководство по детским болезням. Том 8 Иммунология детского возраста. /Ред. А.Ю.Щербина, Е.Д.Пашанов/ - Москва: МЕДПРАКТИКА, 2006 - 432 с.
Ройт А., Бростофф Д., Дейл Д. Иммунология. - М.: Мир, 2000 — 592 с
Ярилин А. А. Иммунология. – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2010 - 752 с.
Leach М., Drummond М., Doig A. Practical Flow Cytometry in Haematology Diagnosis Hardcover. – WILEY-BLACKWELL, 2013.
Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B. – USA: W.B Sounders Company, 2006 - 1798 p.

Подготовка

Взятие крови предпочтительно проводить утром натощак, после 8-14 часов ночного периода голодания (воду пить можно), допустимо днем через 4 часа после легкого приема пищи.

Накануне исследования необходимо исключить повышенные психоэмоциональные и физические нагрузки (спортивные тренировки), приём алкоголя.

Литература

Зурочка А.В., Хайдуков С.В. и др. - Проточная цитометрия в медицине и биологии. – Екатеринбург: РИО УрО РАН, 2013. – 552 с.
Клиническая иммунология и аллергология / Ред. Лолор-младший Г., Фишер Т, Д. Адельман Д../: Пер. с англ. - М.: Практика, 2000. - 806 с.
Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. Том 2./Ред. Долгов В.В., Меньшиков В.В./ – М., ГЭОТАР-Медиа, 2012 – 808 с.
Практическое руководство по детским болезням. Том 8 Иммунология детского возраста. /Ред. А.Ю.Щербина, Е.Д.Пашанов/ - Москва: МЕДПРАКТИКА, 2006 - 432 с.
Ройт А., Бростофф Д., Дейл Д. Иммунология. - М.: Мир, 2000 — 592 с
Ярилин А. А. Иммунология. – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2010 - 752 с.
Leach М., Drummond М., Doig A. Practical Flow Cytometry in Haematology Diagnosis Hardcover. – WILEY-BLACKWELL, 2013.
Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B. – USA: W.B Sounders Company, 2006 - 1798 p.

Показания

Рецидивирующие инфекции, инфекционные заболевания с хроническим и затяжным течением.
Подозрение на генетически обусловленный или приобретённый иммунодефицит.
Аутоиммунные заболевания.
Аллергические заболевания.
Онкологические заболевания.
Обследование реципиентов до и после трансплантации органов.
Обследование пациентов перед серьёзными оперативными вмешательствами.
Осложнённое течение послеоперационного периода.
Контроль терапии цитостатиками, иммунодепрессантами и иммуномодуляторами.

Литература

Зурочка А.В., Хайдуков С.В. и др. - Проточная цитометрия в медицине и биологии. – Екатеринбург: РИО УрО РАН, 2013. – 552 с.
Клиническая иммунология и аллергология / Ред. Лолор-младший Г., Фишер Т, Д. Адельман Д../: Пер. с англ. - М.: Практика, 2000. - 806 с.
Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. Том 2./Ред. Долгов В.В., Меньшиков В.В./ – М., ГЭОТАР-Медиа, 2012 – 808 с.
Практическое руководство по детским болезням. Том 8 Иммунология детского возраста. /Ред. А.Ю.Щербина, Е.Д.Пашанов/ - Москва: МЕДПРАКТИКА, 2006 - 432 с.
Ройт А., Бростофф Д., Дейл Д. Иммунология. - М.: Мир, 2000 — 592 с
Ярилин А. А. Иммунология. – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2010 - 752 с.
Leach М., Drummond М., Doig A. Practical Flow Cytometry in Haematology Diagnosis Hardcover. – WILEY-BLACKWELL, 2013.
Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B. – USA: W.B Sounders Company, 2006 - 1798 p.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Референсные значения субпопуляций лимфоцитов:

Возраст	% от общего количества лимфоцитов	Абсолютное количество клеток х 10⁶/л
СD3 + (Т-лимфоциты)
1-3 мес.	55 - 78	2070 - 6540
3 мес. - 1 год	45 - 79	2280 - 6450
1 - 2 года	53 - 81	1460 - 5440
2 - 6 лет	62 - 80	1610 - 4230
6 - 16 лет	66 - 76	1400 - 2000
> 16 лет	60 - 89	880 - 2400
CD3+CD4+ (Т-хелперы)
1-3 мес.	41 - 64	1460 - 5116
3 мес. - 1 год	36 - 61	1690 - 4600
1 - 2 года	31 - 54	1020 - 3600
2 - 6 лет	35 - 51	900- 2860
6 - 16 лет	33 - 41	700 - 1100
> 16 лет	31 - 61	540 - 1460
CD3+CD8+ (Т-цитотоксические лимфоциты)
1-3 мес.	16 - 35	650 - 2450
3 мес. - 1 год	16 - 34	720 - 2490
1 - 2 года	16 - 38	570 - 2230
2 - 6 лет	22 - 38	630 - 1910
6 - 16 лет	27 - 35	600 - 900
> 16 лет	14 - 36	210 - 1200
CD19+ (В-лимфоциты)
1 мес.-2 года	19 - 31	500 - 1500
2 - 6 лет	21 - 28	700 - 1300
6 - 16 лет	12 - 22	300 - 500
> 16 лет	5 - 19	100 - 480
CD3-CD16+CD56+ (ЕК-клетки)
1 - 4 мес.	2 - 14	40 - 915
4 мес. - 1 год	2 - 13	40 - 915
1 - 2 года	3 - 16	40 - 915
2 - 6 лет	4 - 23	96 - 1330
6 - 12 лет	4 - 26	96 - 1330
12 - 16 лет	6 - 27	100 - 500
> 16 лет	4 - 26	78 - 470
CD3+CD16+CD56+ (ЕКТ-клетки)
1 мес.- 16 лет	0- 10	-
>16 лет	1-13	-
ИРИ (иммунорегуляторный индекс, соотношение CD3+CD4+ / CD3+CD8+
1-3 мес	1,30- 3,50
3-12 мес	1,20-3,50
1-2 года	1,00-3,00
2-6 лет	1,00-2,10
6-16 лет	1,10-1,40
>16 лет	1,00-3,50

Интерпретация результатов:

Значение отклонений некоторых иммунологических показателей
Показатель	Повышение показателя	Снижение показателя
Т-лимфоциты (CD3+)	Иммунное воспаление. Ответ по Тh 1 типу. Ответ по Тh 2 типу.	Гипореактивность (иммунологический паралич).
Т-хелперы, Тh (CD4+)	Активный (острый) воспалительный процесс. При иммунном воспалении: ответ по Тh 1 типу – при инфекционных (вирусных, бактериальных) заболеваниях; по Тh 2 типу – при аллергическом воспалении; при аутоиммунном воспалении – ответ по Тh 1 или 2 типу (при генерализации аутоиммунного процесса).	Гипореактивность (иммунологический паралич). Снижение CD4+ лимфоцитов - основной лабораторный признак вторичного иммунодефицитного состояния.
Т-цитотоксические, (CD8+)	Активный воспалительный процесс при инфекциях: вирусных, других внутриклеточных, грибковых; при онкологических заболеваниях.	Аутоиммунные, аллергические заболевания
В-лимфоциты (CD19+)	Ответ по Тh 2 типу. Острый или активный хронический воспалительный процесс (инфекционный, аллергический, аутоиммунный).	Гипореактивность, перераспределение в очаги воспаления.
Естественные киллеры, ЕК (СD3-CD16+CD56+)	Острые инфекции, активный воспалительный процесс, избыток бактериального или вирусного антигена, избыток суперантигена (комплекса Аг+РНК, образующегося в макрофагах), онкопроцессы.	Снижение относительного содержания ЕК отмечено при высоком уровне Т-лимфоцитов.
Т-ЕК-клетки (CD3+CD16+CD56+)	Длительные хронические воспалительные процессы, тяжелое течение воспалительных процессов, длительная персистенция антигена в организме.	Не имеет диагностического значения.

Литература

Зурочка А.В., Хайдуков С.В. и др. - Проточная цитометрия в медицине и биологии. – Екатеринбург: РИО УрО РАН, 2013. – 552 с.
Клиническая иммунология и аллергология / Ред. Лолор-младший Г., Фишер Т, Д. Адельман Д../: Пер. с англ. - М.: Практика, 2000. - 806 с.
Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. Том 2./Ред. Долгов В.В., Меньшиков В.В./ – М., ГЭОТАР-Медиа, 2012 – 808 с.
Практическое руководство по детским болезням. Том 8 Иммунология детского возраста. /Ред. А.Ю.Щербина, Е.Д.Пашанов/ - Москва: МЕДПРАКТИКА, 2006 - 432 с.
Ройт А., Бростофф Д., Дейл Д. Иммунология. - М.: Мир, 2000 — 592 с
Ярилин А. А. Иммунология. – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2010 - 752 с.
Leach М., Drummond М., Doig A. Practical Flow Cytometry in Haematology Diagnosis Hardcover. – WILEY-BLACKWELL, 2013.
Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B. – USA: W.B Sounders Company, 2006 - 1798 p.

№4192, Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) - CD3, CD4, CD8, CD19, CD16,56

Литература

Литература

Литература

Литература